ELISA试剂盒测定原理有哪些

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　　ELISA试剂盒测定原理有哪些

　　ELISA试剂盒的测定原理主要基于抗原-抗体的特异性结合反应，通过酶标记和显色反应实现目标物质的定量或定性分析。以下是其核心原理和主要类型：

　　一、基本原理‌

　　抗原-抗体结合‌：目标抗原(或抗体)与包被在固相载体(如微孔板)上的对应抗体(或抗原)特异性结合。

　　酶标记与信号放大‌：通过酶标记的二抗或直接标记的酶与目标结合，加入底物后产生可测量的颜色变化。

　　定量分析‌：显色强度与目标物浓度成正比，通过酶标仪测定吸光度值(OD值)进行定量。

　　二、主要类型‌

　　直接ELISA‌：

　　抗原直接包被，酶标记一抗直接结合抗原，步骤简单但灵敏度较低。

　　适用于重组蛋白或重组抗体的结合活性验证。

　　间接ELISA‌：

　　使用未标记的一抗和酶标记的二抗，信号放大效果更好，适用于抗体检测。

　　常用于检测抗体，如重组抗体或疫苗效价的检测。

　　夹心ELISA‌：

　　需两种特异性抗体(捕获抗体和检测抗体)，适合检测复杂样本中的低浓度抗原(如细胞因子)。

　　通过一对配对的抗体形成三明治夹心结构，特异性检测抗原。

　　竞争ELISA‌：

　　用于小分子检测，目标物与标记物竞争结合抗体，信号与目标物浓度负相关。

　　适用于小分子激素、药物等的ELISA测定。

　　三、操作步骤‌

　　包被‌：将抗体/抗原固定在微孔板表面，4℃过夜或37℃孵育1-2小时。

　　封闭‌：使用牛血清白蛋白(BSA)或脱脂奶粉封闭未结合位点，减少非特异性吸附。

　　加样与孵育‌：加入待测样本和对照，37℃孵育使抗原抗体充分结合。

　　洗涤‌：洗去未结合物质，避免假阳性。

　　酶标二抗孵育‌：加入酶标记的二抗，进一步结合。

　　显色与检测‌：加入显色底物(如TMB)，通过酶标仪测定吸光度值。

　　四、注意事项‌

　　试剂选择‌：选择优质抗原抗体和酶标记物，确保试剂稳定性和保存性。

　　操作规范‌：严格遵循操作步骤，避免操作失误导致假阳性或假阴性结果。

　　样本处理‌：正确处理样本，选择合适的实验方法，确保实验结果的准确性。

　　注：以上仅供参考!

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