ELISA试剂盒有哪些常见问题及解决方案？

         ELISA试剂盒有哪些常见问题及解决方案？

         ELISA实验中常遇到的就是‌标准曲线差、无信号、CV值大‌这几个问题，爱赛因小编来帮你梳理一下具体原因和解决办法：

         一、标准曲线不佳

         原因‌：标准品没配准、复溶没做好、移液不准或曲线模型选得不对。

         解决‌：复溶前离心一下，检查有没有不溶物；校准移液器，加样要稳；试试双对数或5参数拟合曲线。

         二、无信号

         原因‌：孵育时间不够、样本浓度太低、试剂活性不足或操作有误。

         解决‌：延长孵育时间，浓缩样本或减少稀释倍数；检查试剂是否过期，按说明书保存；确保加样、洗涤、孵育都规范。

         三、CV值较大

         原因‌：孔里有气泡、洗板不匀、试剂没混好或移液不准。

         解决‌：读板前赶走气泡；洗板要净，洗3-5次；试剂充分混匀；校准移液器，加样要一致。

         四、其他常见问题

         背景高‌：可能是洗涤不净、试剂污染或孵育时间太长。多洗几次，换新枪头，控制好孵育时间。

         假阳性‌：加样时污染了、温育温度太高或操作时间太长。换枪头，控制好温度和时间，尽快完成操作。

         重复性差‌：加样量不一致、操作时间不统一或样本处理不同。尽量固定操作人和条件，样本处理要一致。

         五、质控要点

         标准曲线‌：R²是>0.99，线性范围要覆盖样本浓度。

         复孔CV‌：板内CV<10%，板间CV<15%。

         加标回收率‌：理想在80%-120%之间，偏离太大可能有基质效应。

         六、操作建议

         试剂盒提前平衡到室温，洗板液现配现用，底物避光保存。

         样本避免反复冻融，分装保存；抗凝剂选对类型，高脂样本先离心。

         孵育温度和时间要准，洗涤要净，加样要稳。

         注：以上仅供参考!希望以上信息能帮助您做出合适的选择!

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