Elisa实验：试剂盒检测步骤及使用方法

         Elisa实验：试剂盒检测步骤及使用方法

         ELISA实验的试剂盒检测步骤和使用方法其实不难，核心就是‌规范操作+细节把控‌。下面爱赛因技术小编帮你把关键步骤和注意事项梳理清楚。

         一、实验前准备

         试剂平衡‌：所有试剂（包括标准品、样本、酶标抗体等）使用前需在室温（20-25℃）静置30分钟，避免温度差异影响反应。

         仪器校准‌：移液器需定期校准，确保加样体积准确（误差≤5%）；酶标仪需预热并设置好检测波长（如450nm）。

         样本处理‌：

         血清/血浆‌：自然凝固后离心（2000-3000转/分，20分钟），收集上清，避免溶血。

         组织/细胞‌：匀浆后离心取上清，分装保存于-20℃/-80℃。

         梯度稀释‌：将标准品用稀释液进行系列稀释（如1:2、1:4等），覆盖预期浓度范围。

         加样‌：每孔加入100μL标准品，贴封板膜，37℃孵育60分钟。

         洗涤‌：倒出孔内液体，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

         显色与读数‌：加入TMB底物，避光孵育15分钟，加终止液后5分钟内用酶标仪测OD值。

         三、样本检测

         加样‌：每孔加入100μL待测样本，贴封板膜，37℃孵育60分钟。

         洗涤‌：同标准曲线步骤。

         加酶标抗体‌：每孔加入100μL酶标抗体，37℃孵育60分钟。

         洗涤‌：同标准曲线步骤。

         显色与读数‌：同标准曲线步骤。

         四、结果计算

         标准曲线拟合‌：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

         样本浓度计算‌：将样本OD值代入标准曲线方程，计算实际浓度。

         五、注意事项

         加样精度‌：使用校准后的移液器，加样体积误差≤5%。

         孵育条件‌：37℃恒温孵育，避免温度波动。

         洗涤净‌：洗涤3次，每次3分钟，避免残留液体影响结果。

         显色时间‌：TMB底物避光孵育15分钟，时间过长或过短均影响结果。

         六、常见问题

         标准曲线不佳‌：检查标准品稀释是否准确，或更换试剂盒。

         样本值低于空白‌：可能因样本基质干扰，建议稀释样本或更换标准稀释液。

         重复性差‌：检查移液器是否校准，加样是否均匀。

         注：以上仅供参考!希望以上信息能帮助您做出合适的选择!

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