ELISA和WB的具体操作步骤是什么？

ELISA和WB的具体操作步骤是什么？

ELISA和WB的核心区别在于：ELISA灵敏度更高（可达pg/ml），适合定量检测血清、尿液等体液样本，操作更简单；而WB特异性更强，主要用于定性或半定量分析细胞或组织样本，能提供蛋白分子量信息。

‌双抗体夹心法‌主要用于检测大分子抗原。先将捕获抗体包被在固相载体上，加入待测样本后，样本中的抗原会与固相抗体结合，再加入酶标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物。最后加入底物显色，颜色深浅与抗原含量成正比。

‌竞争法‌则适用于检测小分子抗原或抗体。样本中的待测物与酶标记的待测物竞争结合有限的固相抗体。样本中待测物越多，结合的酶标记物越少，显色越浅，因此颜色深浅与待测物含量成反比。

选择依据‌：

样本类型‌：体液样本优先ELISA，细胞/组织样本选WB。

检测目的‌：需要精确定量选ELISA，关注蛋白表达模式或验证抗体特异性选WB。

实验条件‌：ELISA更易标准化，适合高通量；WB对操作经验要求较高。

做好ELISA的关键‌：

样本处理‌：避免反复冻融，离心去除颗粒物，必要时稀释样本以减少基质效应。

试剂与操作‌：使用新鲜试剂，严格按说明书控制孵育时间和温度，确保洗涤干净。

数据分析‌：绘制标准曲线时确保R²值>0.99，样本OD值应在曲线线性范围内。

注：以上仅供参考，不作为实际数据。

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