Elisa实验：试剂盒检测原理及操作步骤

　　Elisa实验：试剂盒检测原理及操作步骤

　　小鼠ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心法，其核心原理是利用两种特异性抗体分别识别PC分子的不同表位，通过酶催化显色反应实现高灵敏度、高特异性的定量检测。

　　检测原理‌：首先，将捕获抗体包被在微孔板表面。加入样本后，若存在PC抗原，会与捕获抗体结合形成“抗体-抗原"复合物。洗涤去除未结合物质后，加入酶标记的检测抗体，其与PC的另一表位结合，形成“捕获抗体-抗原-酶标抗体"夹心复合物。再次洗涤后，加入底物显色，颜色深浅与PC浓度成正比，通过酶标仪测定OD值即可定量。

　　ELISA实验概述:

　　ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种基于抗原抗体特异性结合的高灵敏度检测技术，通过酶催化显色反应对待测物进行定性或定量分析。

　　其核心原理是将抗原或抗体固定在固相载体上，加入待测样本后，通过洗涤去除未结合物质，再加入酶标记的抗体或抗原形成复合物。最后加入底物显色，颜色深浅与待测物浓度成正比。

　　常用的检测方法包括：

　　双抗体夹心法‌：用于检测大分子抗原，需两个抗体结合不同表位。

　　间接法‌：用于检测抗体，通过酶标二抗放大信号。

　　竞争法‌：适用于小分子抗原或半抗原的检测。

　　该技术具有灵敏度高(可达pg/mL级)、特异性强、操作标准化等优点，广泛应用于医学生物学研究等领域。

　　操作步骤‌：

　　样本准备‌：血清/血浆样本需静置后离心取上清;组织样本需匀浆处理。

　　加样反应‌：每孔加入标准品或待测样本，37℃孵育90分钟，使抗原与包被抗体充分结合。

　　洗涤‌：弃去反应液，用洗涤缓冲液洗板5次，去除未结合物质。

　　加酶标抗体‌：每孔加入酶标抗体，37℃孵育60分钟，形成夹心复合物。

　　再次洗涤‌：同步骤3，确保背景干净。

　　显色‌：每孔加入底物A/B液，避光显色15分钟。

　　终止与测定‌：加入终止液终止反应，立即用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值。

　　注意事项‌：洗板需但避免过度;显色时间严格控制;不同批号试剂不可混用。标准曲线R²应≥0.99，回收率在85%-115%范围内为合格。

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