小鼠Aβ ELISA试剂盒的详细操作步骤

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　　小鼠Aβ ELISA试剂盒的详细操作步骤

　　小鼠Aβ ELISA试剂盒‌的详细操作步骤如下，基于高可信度资料整合优化，确保检测结果准确可靠，适用于血清、血浆、细胞上清及组织匀浆中β淀粉样蛋白(Aβ)的定量分析。

　　检测原理

　　采用‌双抗体夹心法ELISA‌：

　　微孔板预包被特异性抗小鼠Aβ抗体 → 样本中Aβ与固相抗体结合 → 加入HRP标记的检测抗体 → 形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物 → TMB底物显色 → 酶标仪450nm测定OD值 → 通过标准曲线计算Aβ浓度。

　　详细操作流程(96T板)

　　1. ‌试剂与样本准备‌

　　试剂盒从2–8℃取出，‌室温平衡15–30分钟‌，避免冷凝水影响反应。

　　浓缩洗涤液若有结晶，37℃水浴溶解后混匀使用。

　　标准品稀释‌：按说明书梯度稀释(如160 → 80 → 40 → 20 → 10 → 5 pg/mL)，逐级混匀，避免交叉污染。

　　样本处理‌：

　　血清/血浆：3000×g离心10–30分钟，取上清。

　　组织匀浆：按1:9加PBS研磨，5000×g离心5–10分钟取上清。

　　所有样本分装冻存于-20℃，避免反复冻融。

　　禁止使用含NaN₃的样本‌，因其抑制HRP酶活性。

　　2. ‌加样设置‌

　　设‌空白孔‌(不加样品和酶标试剂)、‌标准品孔‌(50μL/孔)、‌待测样本孔‌。

　　样本孔：先加‌40μL样品稀释液‌ + ‌10μL样本‌(终稀释倍数为5倍)。

　　加样至孔底，避免触碰孔壁，轻震混匀。

　　3. ‌37℃温育‌

　　封板膜密封，‌37℃恒温箱温育30分钟‌。

　　避免震动、光照或温度波动。

　　4. ‌洗涤(关键控背景步骤)‌

　　揭掉封板膜，弃液，每孔加满‌300–400μL洗涤液‌(PBST含0.05% Tween-20)。

　　静置30秒后甩干，重复‌5次‌。

　　最后一次在吸水纸上轻拍拍干，防止残留液滴稀释后续试剂。

　　5. ‌加酶标试剂‌

　　每孔加‌50μL HRP标记抗体‌(空白孔除外)。

　　重新封板，‌37℃温育30分钟‌。

　　6. ‌再次洗涤‌

　　同第4步，洗涤5次并拍干。

　　7. ‌显色反应‌

　　每孔加‌显色剂A液50μL + B液50μL‌，轻摇混匀。

　　37℃避光显色10–15分钟‌(Aβ1-42建议10分钟，Aβ40可延长至15分钟)。

　　显色时间过长会导致背景升高，需严格控制。

　　8. ‌终止反应‌

　　每孔加‌50μL终止液‌，颜色由蓝变黄。

　　终止后‌15分钟内完成读数‌，防止OD值漂移。

　　9. ‌测定OD值‌

　　酶标仪设置：‌450nm波长‌，参考波长可选630nm校正。

　　以空白孔调零，记录各孔OD值。

　　10. ‌结果计算‌

　　绘制标准曲线：浓度为横坐标，OD值为纵坐标。

　　使用线性回归或4参数拟合(推荐)计算样本浓度。

　　实际浓度 = 计算值 × 稀释倍数(如5倍)。

　　建议做复孔，取平均值以提高重复性。

　　注：以上仅供参考，不作为实验依据，具体请联系品牌或技术老师!

　　小鼠Aβ ELISA试剂盒‌爱赛因生物技术(广州)有限公司专注于生物医药、临床诊断、IVD检测、微流控芯片等领域的封板膜及生物医疗胶带产品的研发、生产与销售。更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎来电!