ELISA试剂盒试验中有哪些不容忽视的要点

　　ELISA试剂盒试验中有哪些不容忽视的要点

　　ELISA试剂盒实验要成功，关键在于细节把控。ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。下面爱赛因技术小编就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。

　　一、实验前准备

　　试剂检查与平衡‌

　　确认试剂有效期，检查是否有沉淀、变色(如底物溶液变蓝需更换)。

　　所有试剂(包括标准品、样本)需在室温平衡20-30分钟，避免直接接触试剂管底部。

　　标准品需按说明书精准稀释，使用专用稀释液，确保浓度梯度准确。

　　样本处理‌

　　血清/血浆样本需规范收集，避免溶血(血红蛋白会导致背景升高)。

　　长期保存需分装冻存(-20℃或-80℃)，避免反复冻融(超过3次会导致蛋白降解)。

　　细胞裂解液、组织匀浆需确保裂解充分，加入蛋白酶抑制剂，离心去除杂质。

　　器材准备‌

　　酶标板需检查破损、漏液，使用前不可用手触摸板孔底部。

　　移液器需校准保养，避免产生气泡影响加样准确性。

　　二、操作过程

　　加样操作‌

　　从0浓度或低浓度标准液开始分注，20分钟内完成一块孔板。

　　吸头需贴壁放液，避免伸到反应孔底部，移液器倾斜角度不超过45度。

　　孵育与洗涤‌

　　在说明书要求温度下孵育，注意受热均匀，避免叠放反应板。

　　去除孔内液体时垂直甩板，一次洗涤后需拍干。

　　底物与终止液‌

　　底物A需避光保存，底物B对光敏感，避免长时间暴露。

　　实验完成后立即读取OD值，避免底物挥发影响结果。

　　三、实验后处理

　　数据记录与分析‌

　　记录实验日期、试剂批次、操作人等信息，便于追溯。

　　确认对照是否合格(空白对照吸光度值需低于0.1，阴性对照需低于cutoff值)。

　　废弃物处理‌

　　含酶标试剂、样本的废液需倒入专用生物废液桶，用过的枪头、酶标板需放入医疗垃圾袋。

　　关键提示‌：严格遵循说明书操作，避免主观调整;设置完整的对照体系，及时排查异常(如背景过高、信号无梯度)。

　　注：以上仅供参考，不作为实验依据，具体请联系品牌或技术老师!

　　爱赛因生物技术(广州)有限公司专注于生物医药、临床诊断、IVD检测、微流控芯片等领域的封板膜及生物医疗胶带产品的研发、生产与销售。更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎来电!