ELISA试剂盒实验中会遇到很多问题

　　ELISA试剂盒实验中会遇到很多问题

　　ELISA实验确实容易遇到各种小状况，别担心，我来帮你梳理常见问题和解决方法：

　　一、背景颜色深/非特异性染色

　　‌原因‌：洗涤不充分、试剂污染、孵育时间过长或抗体浓度过高。

　　‌解决方法‌：确保洗涤液注满微孔且无残留，重复洗涤2-3次;更换吸头避免交叉污染;严格按说明书控制孵育和显色时间;稀释抗体至推荐浓度，避光保存底物。

　　二、所有孔均无明显颜色

　　‌原因‌：试剂混淆、酶标物失活或步骤遗漏。

　　‌解决方法‌：检查试剂标签，确认无遗漏步骤;使用新鲜蒸馏水配制缓冲液，确保试剂室温平衡30分钟;更换酶标物或试剂盒(若过期或储存不当)。

　　三、假阳性，背景高甚至花板

　　‌原因‌：加样时污染、加酶时污染、温育箱温度过高、操作时间过长导致反应时间不同、洗液稀释倍数过高、洗板不充分、酶和显色液污染、显色后未及时终止反应。

　　‌解决方法‌：更换枪头避免污染，加酶时不要接触标本，注意吸头不要污染;控制温育箱温度在37±0.5℃;在尽可能短的时间内完成操作，避免堆积板子;按照要求稀释洗液，并延长浸泡时间，确保洗板次数;使用清洁的容器，避免污染;显色完成后立即终止反应。

　　四、重复性不好

　　‌原因‌：加样量不一、操作时间不一致、操作人员不同、标本处理不同。

　　‌解决方法‌：确保加样量与时间一致，使用同一名操作人员，模拟相同的反应条件;标本保证一致，无污染;注意移液器的校准。

　　五、标准曲线不佳

　　‌原因‌：倍比标准品时未充分混匀;标准品溶液配置有误或标准品已降解;样本中无检测物或检测物含量极低;样本中其他物质影响/掩盖检测;样本中检测物浓度过高，Hook效应导致假低值。

　　‌解决方法‌：使用校准过的移液器，快速、等量分配标准品;确认稀释正确，并按推荐方式保存和处理标准品;对样本进行适当稀释，降低其他物质的干扰;适当倍数稀释样本，使检测物浓度在试剂盒检测范围内。

　　六、阴性对照孔与空白孔的OD值偏高

　　‌原因‌：血清标本中存在非特异性抗体或蛋白质引起的。

　　‌解决方法‌：优化样本处理，避免使用溶血、高血脂样本;确保洗涤充分，避免试剂污染。

　　七、阳性对照不显色

　　‌原因‌：漏加阳性对照、阳性对照孔忘加酶或忘加显色剂、阳性对照受污染。

　　‌解决方法‌：检查试剂标签，确认无遗漏步骤;更换阳性对照或试剂盒(若过期或储存不当)。

　　八、整板不显色

　　‌原因‌：试剂和保存不当、已经失活、忘记加酶、忘记加抗原或中和试剂、忘记加显色剂A或显色剂B。

　　‌解决方法‌：检查试剂标签，确认无遗漏步骤;使用新鲜蒸馏水配制缓冲液，确保试剂室温平衡30分钟;更换酶标物或试剂盒(若过期或储存不当)。

　　九、阳性对照读数不正常

　　‌原因‌：加入标本后未进行必要的混匀、标本稀释错误、加样量不正确、冷冻标本未溶解混匀、标本中含有防腐剂。

　　‌解决方法‌：确保标本充分混匀，避免使用含防腐剂的标本;校准移液器，确保加样量准确

　　注：以上仅供参考，不作为实验依据，具体请联系品牌或技术老师!

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