ELISA实验操作要点：如何降低ELISA背景

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　　ELISA实验操作要点：如何降低ELISA背景

　　降低ELISA背景，核心是减少非特异性结合和清除未结合物。以下是关键操作要点：

　　1. 充分洗涤‌

　　洗涤不干净是背景高的常见原因。建议增加洗涤次数至5次，每次浸泡1分钟，确保洗去所有未结合的抗体和酶标记物。

　　2. 优化封闭‌

　　封闭不干净会留下大量非特异性结合位点。使用3% BSA或5%脱脂牛奶作为封闭液，孵育时间至少2小时，确保所有非特异性位点被封闭。

　　3. 控制抗体用量和孵育条件‌

　　抗体浓度过高或孵育时间过长都会增加非特异性结合。严格按照说明书稀释抗体，避免不同批号混用，并控制孵育温度在37±0.5℃。

　　4. 避免交叉污染‌

　　加样时产生的气溶胶、移液器尖的残留都可能导致样本间污染。务必更换枪头，避免枪头接触孔壁，并确保所有容器清洗干净。

　　5. 检查试剂和仪器‌

　　确保缓冲液、洗涤液和底物溶液未被污染或变质。定期校准移液器和酶标仪，保证加样精度和检测准确性。

　　6. 规范操作细节‌

　　加样时从低浓度孔开始，20分钟内完成一块板的分注。所有试剂使用前需恢复至室温，避免因温度不均影响反应。

　　通过优化这些环节，可有效降低背景信号，提升实验的准确性和可靠性。

　　注：以上仅供参考!

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